1. Voskový ponoření
Transparentizovaná tkáň musí být voskována, aby nahradila transparentizační činidlo (jako je xylen) parafínovým voskem, takže parafinový vosk může proniknout do tkáně a poskytnout podporu pro následné krájení.
Provozní kroky: Umístěte transparentizovanou tkáň do roztaveného parafínového vosku, obvykle přibližně 60 stupňů, aby se zajistilo, že parafinový vosk může plně proniknout do tkáně.
Poznámky: Doba ponoření vosku musí být upravena podle velikosti a typu tkáně, obvykle 1-2 hodin.
2. krájení
Voskově impregnovaná tkáň musí být nakrájena na následné barvení a pozorování.
Provozní kroky: Použijte kráječ k rozřezu tkáně na tenké plátky, obvykle 4-6 mikrony tlusté.
Poznámky: Ujistěte se, že čepel je ostrá při krájení, aby nedošlo k roztržení nebo deformaci tkáně.
3. barvení
Po krájení je zapotřebí barvení, aby se různé části tkáně vykazovaly různé barvy pro snadné mikroskopické pozorování.
Kroky operace: Umístěte plátky do barvení. Mezi běžné metody barvení patří barvení hematoxylin-eosinu (barvení H&E).
Poznámky: Doba barvení musí být upravena podle metody barvení a typu tkáně, aby se zabránilo příliš tmavé nebo příliš světlému barvení.
4. Těsnění
Po zbarvení musí být plátky utěsněny, aby se chránily plátky a usnadnily mikroskopické pozorování.
Kroky provozu: Použijte těsnicí roztok k opravě plátek na skluzu a poté je zakryjte krycí sklíčka.
Poznámky: Vyvarujte se generování bublin při těsnění a ujistěte se, že roztok těsnění rovnoměrně pokrývá plátky.
5. zobrazování a pozorování
Po utěsnění lze plátky zobrazovat a pozorovat pomocí mikroskopu.
Kroky operace: Umístěte uzavřené plátky pod mikroskop, upravte zaostření a jas a pozorujte a fotografují.
Poznámky: Během procesu pozorování věnujte pozornost úpravě zvětšení a otvoru mikroskopu, abyste získali nejlepší pozorovací účinek.
